Modulação na expressão dos genes BMP-7, TNFα e TGF-β de um cariostático experimental nanoparticulado em linhagem fibroblástica L929 - ROMAGNI, Gabriela Paschoalini (2021)
O diamino fluoreto de prata (DFP) é utilizado há muito tempo como agente preventivo e inibidor da cárie dentária, entretanto, por promover pigmentação dentária, seu uso é restrito. Cariotáticos alternativos a base de nanopartículas de prata (AgNPs) vem sendo estudados devido ao poder antimicrobiano das AgNPs sem pigmentar os substratos. Porém, consequências desse material sobre as células ainda são controversas, sendo necessária a investigação dos efeitos adversos e respostas celulares associadas à exposição de AgNPs. Dessa forma, o objetivo desse estudo in vitro foi avaliar se o cariostático a base de AgNPs modula a expressão dos genes BMP-7 (Proteínas morfogenéticas ósseas), TNF-α (Fator de necrose tumoral alfa) e TGF-β (Fator de crescimento transformador beta) em células fibroblásticas L929. Os experimentos foram realizados de maneira independente, em seis grupos experimentais: 1- controle (meio de cultura) 2- cariostático experimental nanoparticulado 0,016% na concentração de 1%, 3- cariostático experimental nanoparticulado 0,016% na concentração de 0,5%, 4- cariostático experimental nanoparticulado 0,016% na concentração de 0,1%, 5- componente A do cariostático experimental nanoparticulado 0,016% na concentração de 1% (nanopartículas), 6- componente B do cariostático experimental nanoparticulado 0,016% na concentração de 1% (estabilizante). O tempo de tratamento empregado foi de 24 horas. Para a extração do RNA total e conversão em cDNA foi utilizado kit Cell to cDNA (Invitrogen, Life Technologies) de acordo com as instruções do fabricante. Após sua extração, as amostras foram quantificadas por espectrofotometria (NanoDrop- ND-1000). A expressão dos genes BMP-7, TNF-α e TGF-β foi avaliada pelo método da comparação do limiar dos ciclos (ΔΔCT), após a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real pelo sistema TaqMan (Applied Biosystems, Foster City, EUA), normalizados pela expressão do gene GAPDH (controle endógeno). Após a análise dos dados, verificouse que houve uma expressão diminuída dos genes TNF-α e TGF-β em todos os grupos testados. Já os grupos tratados com as nanopartículas nas concentrações de 1% e 0,5% aumentaram a expressão do gene BMP-7 em 8 vezes em relação ao grupo controle. Pode-se concluir que o material testado não estimulou a expressão dos genes envolvidos no processo inflamatório, (TNF-α e TGF-β) podendo ser benéfico no reparo tecidual, adicionalmente, o cariostático a base de AgNPs aumentou a expressão do gene BMP-7, responsável pela mineralização de tecido ósseo e dentário