Produção de antígeno recombinante da proteína do nucleocapsídeo de hantavírus amazônicos e avaliação por teste imunoenzimático - Mendonça, Maria Helena Rodrigues de (2017)
Resumo: A Síndrome Pulmonar por Hantavírus (SPH) é uma doença antrozoonótica emergente reconhecida apenas no Novo Mundo e tem como agentes etiológicos os hantavírus (gênero Hantavírus, família Bunyaviridae), que são transmitidos aos humanos através de inalação de aerossóis de excretas de roedores infectados. O diagnóstico sorológico dos casos suspeitos de SPH é feito pelo ensaio ELISA para a detecção de anticorpos das classes IgG e IgM. Sendo assim, este trabalho visa à expressão de antígenos recombinantes baseados na nucleoproteína dos hantavírus para o uso em técnicas de ELISA. Para tal, foi realizada uma avaliação in silico, com base no alinhamento de sequencias do gene N de hantavírus Amazonicos, para a análise de hidrofobicidade, epitopos, otimização de expressão, seguida de síntese comercial. A proteína N inteira e truncada foram expressas em sistema Escherichia coli (BL21 DE3 Star), seguido de purificação por cromatografia de afinidade. Para a avaliação do reconhecimento dos antígenos recombinantes em ELISA indireto, foram selecionadas 370 amostras soro/sangue, sendo 140 sabidamente positivas para hantavírus e 176 sabidamente negativas para hantavírus, 54 positivas para outros patógenos, no período de 2006 a 2014. Foi obtido um alvo solúvel (HTN-120) e três alvos insolúveis (HTN-230/370, HTN-GPGPG e HTN-CONS), dos quais apenas a proteínas HTN-120 e HTN-CONS foram reconhecidas por imunobloting. Estes antígenos apresentaram uma sensibilidade de 62,14% e 90% para IgM e 75,71% e 57,14% para IgG, respectivamente. A coorte de amostras testadas apresentou uma diferença no reconhecimento das proteínas ao longo dos anos, por isso, a sensibilidade obtida no período de 2010 a 2014 apresentaram excelentes resultados de 87,40% (IgM) e 97,14% (IgG) para HTN-CONS e 97,14% (IgM) e 79,09% (IgG) para HTN-120. A especificidade obtida para a proteína HTN-CONS foi de 97,8% (IgG) a 100% (IgM), e para HTN-120 foi de 100% para os dois anticorpos. A análise da curva ROC, mostrou que o desempenho de todos os conjuntos (antígenos/anticorpos) foi estatisticamente significativo (p < 0,0001), representando testes com boa acurácia. Por fim, concluí-se que foi obtido dois antígenos recombinantes com grande potencial para o uso em diferentes técnicas imunológicas na detecção de anticorpos contra hantavírus, isso será de grande valia para a rede de vigilância brasileira, também podendo ser usado em estudos ecoepidemiológicos na Amazônia brasileira.