Caracterização biológica e molecular de isolados de Apple stem grooving virus e construção de um clone infeccioso. - SOUZA, E. B. de (2016)
O Apple stem grooving virus (ASGV), espécie tipo do gênero Capillovirus, é conhecido como um vírus latente causador do acanelamento do lenho da macieira, devido ao principal sintoma observado em espécies suscetíveis, infecção podendo levar à perda de qualidade de frutos e queda na produtividade. O vírus já foi diagnosticado em diversas partes do mundo e atualmente, existem depositados no GenBank, dezoito sequências de genomas completos de isolados de ASGV, e várias sequências parciais principalmente da região da capa proteica. O presente trabalho está dividido em dois capítulos. O capítulo l teve como objetivo a caracterização biológica e molecular de dois isolados de ASGV (M219-3 e M220), e de forma mais específica, a clonagem e sequenciamento do genoma completo dos mesmos e a análise filogenética em comparação com demais sequências disponíveis. Os fragmentos foram amplificados por RT-PCR, clonados, sequenciados e analisados com os programas Clustal W e Lasergene. O capítulo ll teve como objetivo a construção de um clone infeccioso, a partir do isolado M220, utilizando-se a técnica Gibson Assembly. Ambos isolados apresentaram-se de forma similar quanto a expressão de sintomas morfológicos. Os resultados obtidos permitiram a obtenção das primeiras sequências genômicas completas de isolados brasileiros de ASGV, bem como a construção de um clone infeccioso. A identidade entre M219-3 e M220 foi de 92.2%, quando comparada a sequência de nucleotídeos, e 95.3% e 93.3%, quando comparadas as sequencias de aminoácidos da proteína de movimento e capsídeo, respectivamente. A análise filogenética da proteína de movimento dos isolados com as sequências depositadas determinou dois grupos distintos quanto ao hospedeiro. M219-3 e M220 agruparam-se juntamente com isolados cujo os hospedeiros eram predominantemente maça e pera. Dada a relevância da infecção causada por esse vírus, o trabalho contribuirá para estudos da variabilidade genética dessa espécie viral, bem como para a elucidação da associação do ASGV com a patologia já relatada na literatura.