Produção de antígenos do vírus da artrite encefalite caprina para imunodiagnóstico. - LOPES JUNIOR, C. A. F. (2011)
Resumo: Os Lentivírus de pequenos ruminantes são responsáveis por uma significante perda econômica que proporcionou o desenvolvimento de eficientes programas de controle e monitoramento na Europa e em outros países. O diagnóstico da CAE é baseado principalmente em testes sorológicos. A Organização Mundial da Saúde Animal (OIE) recomenda a utilização da Imunodifusão em gel de agarose (IDGA) pelo baixo custo, alta especificidade e praticidade de execução. Os antígenos utilizados para o diagnóstico sorológico são compostos principalmente pelas proteínas estruturais p28 e gp135. O IDGA pode determinar resultados falsonegativos, por ser um teste de baixa sensibilidade. Nesse sentido a produção de antígenos virais é importante nos testes de detecção da CAE, pois, trata-se de um insumo crítico que influencia diretamente na sensibilidade dos testes sorológicos. No processo de extração e purificação de proteínas são utilizados sistemas contendo polímeros ou surfactantes. Os sistemas que contêm surfactantes são mais simples e menos onerosos. Atualmente o SDS (dodecil sulfato de sódio) tem sido o surfactante de preferência em trabalhos com a proposta de extrair e purificar antígenos oriundos de Lentivirus de pequenos ruminantes. Nesse sentido este trabalho por objetivo avaliar odesempenho de outros surfactantes na produção de antígenos do vírus da artrite e encefalite caprina em relação ao surfactante SDS.Nos tratamentos avaliados pelo método de diagnóstico IDGA observou-se uma melhoria na difusibilidade dos antígenos em relação ao controle não submetido ao tratamento com surfactantes. Os surfactantes CHAPS e Triton x-100 apresentaram reações tanto para o pellet quanto para o sobrenadante, mesmo com a presença de interferentes, como a albumina no sobrenadante, denotando a presença de proteínas virais. Entretanto, nos ensaios de Western Blotting apenas o tratamento com CHAPS apresentou um resultado satisfatório em todas as concentrações utilizadas. Abstract: The small ruminantslentiviruses are responsible for a significant economic loss that enabled the development of efficient control and monitoring programs in Europe and other countries. The diagnosis of CAE is mainly based on serological tests.The World Organisation for Animal Health (OIE) recommends the use of agarose gel immunodiffusion (AGID) for its low cost, high specificity and practicality of implementation. The antigens used for serological diagnosis are composed mainly by structural proteins p28 and gp135. The AGID can determinefalse-negative results, dueto be a test of low sensitivity.Thus the production of viral antigens is important in testing for CAE, for this is a critical input that may influence the sensitivity of serological tests. In the protein extraction process, purification systems are used containing polymers or surfactants.The systems containing surfactants are simpler and less expensive. Currently, the SDS (sodium dodecyl sulfate) has been the surfactant preferably to extract and purifysmall ruminant lentivirus antigens.Therefore,this work aim to evaluate the performance of other surfactants in the caprine arthritis and encephalitis virus antigens production in relation to the surfactant SDS. The treatments evaluated by diagnosis method AGID was observed an improvement in the diffusion capacity of the antigens compared to the control not added with surfactants.The CHAPS and Triton X-100 surfactants had reactions to both: pellet and supernatant, indicating the presence of viral proteins, even with the presence of interfering as albumin in the supernatant.However, in Western blotting assays only the treatment with CHAPS showed a satisfactory result at all concentrations used.