Seqüenciamento parcial do DNA mitocondrial de Biomphalaria straminea e análise comparativa com Biomphalaria glabrata e Biomphalaria tenagophila - Goveia, Christiane Oliveira (2010)
No Brasil, existem três espécies hospedeiras intermediárias do Schistosoma mansoni: Biomphalaria glabrata, B. tenagophila e B. straminea. Em virtude da importância epidemiológica dessas espécies, técnicas moleculares vêm sendo introduzidas no estudo destes moluscos. Com o desenvolvimento da técnica de sequenciamento automático de nucleotídeos, tornou-se possível aumentar consideravelmente as informações sobre o genoma de diversos organismos, inclusive sobre o DNA mitocondrial de moluscos, no qual os estudos vêm crescendo nos últimos anos. Das espécies do gênero Biomphalaria, B. glabrata e B. tenagophila têm o seu genoma mitocondrial totalmente sequenciado. Neste trabalho foi parcialmente sequenciado e caracterizado o DNAmt de B. straminea e comparado aos de B. glabrata e B. tenagophila. Para sequenciar o DNAmt de B. straminea, foi extraído o DNA total da região cefalopodal do molusco. Inicialmente as regiões 16S, citocromo c oxidase subunidade I (COI), 12S, citocromo c oxidase subunidade III (COIII) e ND1 foram parcialmente amplificadas e sequenciadas. A partir das sequências obtidas, iniciadores específicos foram desenhados para amplificar quatro fragmentos maiores do DNA mitocondrial de B. straminea: 12SCOIII, COIII-COI, COI-16S e 16S-ND1, que foram clonados e sequenciados. Para a amplificação desses fragmentos foram utilizados iniciadores direcionados para a técnica de PCR longo e em seguida desenhados iniciadores internos (primer walking). Foram sequenciados 7.764 nucleotídeos, totalizando 2.588 aminoácidos, relativos aos genes: COI, COIII, ND1 (parcial), ND2, ND3, ND4, ND5 e ND6. Foi realizada a comparação das sequências dos aminoácidos, dos códons de iniciação e de parada entre B. straminea, B. tenagophila e B. glabrata, sendo encontradas diferenças no tamanho e na composição dos genes. A ordem dos genes de B. straminea foi a mesma que a de B. tenagophila e B. glabrata. A sequência nucleotídica do gene COI foi analisada devido ao seu potencial na separação de espécies, baseada na abordagem de código de barra de DNA (DNA Barcode). Esta análise permitiu distinguir B. straminea das outras duas espécies transmissoras da esquistossomose no Brasil.