Imunização de camundongos com fragmentos recombinantes de cinesina de Leishmania chagasi e/ou plasmídeos codificando IL-12 e IL-2 murinas - Teixeira, Naiara Carvalho (2011)
Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo de cinco antígenos recombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi, usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina. No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/ saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1- mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT- NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2- NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6, apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6 ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50 ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente, somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6.