Efeitos dos fibroblastos associados ao câncer e do bloqueio farmacológico de GLI na invasão e migração em células de carcinoma escamocelular de boca - Vidal, Manuela Torres Andion (2020)
INTRODUÇÃO: Os cânceres de boca são um problema de saúde pública devido à alta incidência, prevalência e mortalidade. Dentre estes, o carcinoma escamocelular de boca (CEB) é o subtipo histológico mais comum. A via Hedgehog (Hh) já foi descrita em diversos tipos de cânceres, e sua ativação desencadeia a expressão de genes que regulam a proliferação, a angiogênese e a invasão tumoral. A percepção do câncer tem sido ampliada e compreendida em um contexto de microambiente, no qual os fibroblastos associados ao câncer (CAF, do inglês, carcinoma-associated fibroblasts) têm sido relacionados com a progressão tumoral. OBJETIVO: Avaliar o efeito de CAF na expressão de genes Hh em célula de CEB, bem como analisar se o bloqueio farmacológico desta cascata sinalizadora, em CAF, pode ter efeito na expressão de genes relacionados a cascata Hh, migração e invasão em célula CEB. MATERIAL E MÉTODOS: Foram utilizadas linhagens de CEB (CAL27, SCC4, SCC9 e HSC3), culturas primárias de fibroblastos normais de boca (NOF) e CAF de boca (CAF). Em células de CEB e fibroblastos, foram realizadas imunofluorescência, western blot e expressão gênica para caracterização da via Hh nesses tipos celulares. Em amostras de CEBs humanos, foi realizada a imuno-histoquímica para os anticorpos \03B1-SMA, SHH, IHH, MMP9 e MMP14. As células HSC3 e CAL27 foram estimuladas com o SHH recombinante e analisada a expressão dos genes componentes da via Hh. Para bloqueio farmacológico da via Hh, foi utilizado o GANT61 em CAF e CAL27. Foi coletado meio condicionado por CAFs e por CAFs com a via Hh bloqueada, com o qual as células CAL27 foram incubadas, e avaliada a expressão de genes relacionados à via Hh, invasão e migração celular. RESULTADOS: Em CEBs humanos, foi encontrada uma forte correlação positiva entre fibroblastos \03B1-SMA+ e as proteínas SHH e MMP9, na região de front tumoral. A expressão gênica de componentes da via Hh foi observada nas linhagens de CEB, bem como em NOF e em CAF. Nas linhagens de células tumorais (HSC3 e CAL27) e no CAF, foi observada a marcação de proteínas da via Hh. Após estímulo com SHH recombinante, as células HSC3 e CAL27 apresentaram uma maior expressão dos genes PTCH1 e GLI1. Em CAL27, a incubação com o meio condicionado por CAFs foi capaz de aumentar os níveis de transcritos de RNAm de genes da via Hh e genes envolvidos na migração e invasão celular, como MMP9, MMP14, Osteopontina, E-caderina e \03B2-catenina. Após o bloqueio da via, observou-se uma interrupção no aumento da expressão dos genes supracitados, nos diferentes tempos estudados. CONCLUSÕES: Os CAFs são fontes de ligantes Hh e regulam a via Hh nas células de CEB, através da sinalização parácrina reversa. O meio condicionado por CAFs aumenta a expressão de genes relacionados à migração e invasão celular, favorecendo a progressão do CEB. E ainda, o bloqueio farmacológico dos CAFs e CAL27 diminui a expressão desses genes. Adicionalmente, a via Hh pode ser considerada um potencial alvo farmacológico no CEB.