Análise fenotípica e genotípica de clones da cepa Colombiana do Trypanosoma cruzi, isolados na fase aguda, precoce e avançada da infecção. Investigação da resposta à quimioterapia - Camandaroba, Edson Luiz Paes (2005)
As cepas do Trypanosoma cruzi são constituídas por populações multiclonais, heterogêneas, diplóides e apresentam polimorfismo nos fragmentos de restrição no minicirculo do kDNA e nos cromossomos do nDNA. Esta variabilidade genética intraespecífica das cepas é correlacionada ao seu comportamento biológico, tropismo tissular e à resposta aos quimioterápicos. A cepa Colombiana do T. cruzi, protótipo do Biodema Tipo III, Zimodema Z1, classificada como T. cruzi I é altamente resistente ao benzonidazol e ao nifurtimox, No presente estudo, investigou-se a composição clonal desta cepa. Foram estudadas em camundongos o comportamento biológico, o histotropismo, caracteres bioquímicos e genéticos e a resposta ao benzonidazol de 12 clones. Foram isolados sete clones no 30° dia de infecção, no pico da parasitemia (fase aguda avançada) e cinco clones no 10° dia de infecção (fase aguda precoce). Os clones isolados foram submetidos a passagens sucessivas em camundongos albinos Suíços para a obtenção do inóculo de 1x10® tripomastigotas, para infecção dos animais dos grupos experimentais. O comportamento biológico foi avaliado pela parasitemia, estudo morfológico dos parasitos e mortalidade dos animais infectados. Os padrões isoenzimáticos para os diversos clones foram obtidos pelas enzimas ALAT, ASAT, PGM e GPI. Os animais infectados com cada clone e com a cepa parental foram submetidos ao tratamento com benzonidazol durante 90 dias na dose de 100 mg/kg/dia. O estudo genéíco foi realizado pela amplificação por POR de fragmentos de 330 pares de bases das porções variáveis do minicirculo do kDNA e por RFLP. Os fragmentos foram digeridos com as enzimas de restrição Rsa I, Eco RI e Hinfl No geral o estudo biológico mostrou homogeneidade entre os clones e entre os clones e a cepa parental. Houve variação na parasitemia sendo que foi mais elevada em quatro dos sete clones isolados no 30° dia da infecção e em três dos cinco clones isolados no 10° dia. A caracterização isoenzimática incluiu os clones no mesmo Zimodema Z1, idêntico á cepa Colombiana parental. O estudo genético mostrou que os clones e a cepa parental apresentaram idêntico padrão de bandas nos fragmentos de restrição gerados pelas enzimas de restrição. O histotropismo dos clones foi ubiquitário e não restritivo, foram mais encontrados no músculo esquelético e miocárdio, seguido pela presença de parasitos na parede intestinal, células de Kupffer e macrófagos do baço, plexo de Auerbach e adipócitos, Todos os clones apresentaram-se altamente resistente ao benzonidazol com índices de cura de 0% a 16, 7% (para os clones isolados no 30° dia) e de 0% a 36,3% (para os clones isolados no 10° dia). A cepa Colombiana do T. cruzi apresenta uma grande homogeneidade populacional, sugerindo a predominância de um clone principal responsável pelas características da cepa.