Caracterização molecular de uma nova proteína tirosina quinase, SmFes, de Schistosoma mansoni. - Ribeiro, Fernanda Ludolf (2005)
A identif icação de moléculas sinalizadoras e a elucidação de processo s de transdução de sinal de Schistosoma mansoni são necessárias para o entendi mento da interação hospedeiro- parasito e de proces sos fisiológicos do parasito. Proteínas tirosinas quinase (PTK s) são molécu las importan tes na comunica ção intra e intercelu lar, tendo um papel crucial nos mecan ismos de transdução de sinal. Estas proteínas estão envolvidas nos processo s de desenvolvim ento, diferenciação e comuni cação celular entre outros. Uma nova PTKs foi identificad a em S. mansoni e nomeada, SmFes. SmFes é um gene de cópia única e o seu cDNA comple to contém uma ORF de 3.780 pb. SmFes exibe característi cas da família Fes/Fps/Fer das PTKs, com assinaturas de domín io proteína quinase, SH2 e coiled- coil característ icos. SmFes é o prime iro gene da família Fes/Fp s/Fer identificado em S. mansoni. Análise filogenétic a revelou que SmFes está relacionada a proteínas da família Fes/Fps/Fer, agrupadas mais próximas às proteínas ortólogas de organismos invertebrados. O alinham ento entre o cDNA de SmFes e seqüências genôm icas depositadas pelos bancos de dados de S. mansoni indicara m a presença de 17 introns, alguns demonstrados experi mentalmente. Análises parciais de clones de cDNA indicara m a inserção de 9 pb na posição 3’ do exon 10, formando duas populações de cDNA, comprovadas por RFLP. A análise da seqüência genômic a indicou que existem dois possíveis sítios de edição do RNA na proximidad e 5’ do intron, indicando um evento de edição alternat iva. A existência de um alelo contendo uma inserção de 15 pb na seqüência genômi ca foi observada. As amplif icaçõ es de diferentes espécies de Schistosoma com pares de iniciador es desenhados para SmFes indicara m a presença de ortólogos de SmFes em várias espécies do gênero. SmFes é transcrita em baixos níveis nas diversas fases de desenvolvi mento do parasito, com uma maior taxa de transcrição em verm es machos, como detectado por PCR em tempo real e northern- blot. A expressão da proteína SmFes foi verificada em esporocisto, mirac ídio, verme adulto e em nível mais elevado em cercári a. Uma proteína recombinan te de SmFes foi expressa para ser usada em experim entos de identif icação de parceiros de SmFes em futuros ensaios de co-precipitaç ão e també m em experim entos de duplo híbrido. Vários possíveis parceiros de SmFes foram identificados por análise compu tacion al. A compre ensão de genes envolvidos nos mecan ismos de transdução de sinal pode fornecer novas estratégias de desenvolvi mento de drogas.