A exonuclease XRNA e o metabolismo de mRNA em Trypanosoma cruzi - Costa, Jimena Ferreira da (2015)
A regulação da expressão gênica em tripanossomatídeos ocorre majoritariamente pelo controle de eventos pós-transcricionais. Dentre estes, mudanças na estabilidade e acesso dos mRNAs à maquinaria de tradução estão diretamente relacionados à adaptação destes parasitas durante o ciclo de vida. Grânulos de mRNA, como os P-bodies, e grânulos de estresse, são compostos por mRNPs e responsáveis por regular a expressão de genes. Os grânulos de estresse estão envolvidos na triagem e estocagem de mRNAs, enquanto os P-bodies são sítios de estocagem e/ou degradação de diversos transcritos. Em tripanossomatídeos, algumas proteínas marcadoras de grânulos de estresse e P-bodies já foram identificadas, entre elas as proteínas DHH1, LSM1-7, SCD6, POP2 e XRNA. Entretanto, a função destes grânulos ainda não foi completamente elucidada. Por exemplo, DHH1 de T .cruzi está presente em grânulos de mRNA citoplasmáticos independentes de polissomos e com características semelhantes aos grânulos de estresses e P-bodies de leveduras e mamíferos. Por isso, ainda não foi possível definir se estes grânulos participam especificamente da estocagem ou degradação dos mRNAs. Por isso, neste trabalho decidimos investigar a participação da exonuclease TcXRNA e sua relação com grânulos de mRNA em T. cruzi para ajudar a definir o papel destes grânulos. Nós verificamos que a proteína TcXRNA, uma exonuclease 5’→3’ conservada e considerada uma marcadora de P-bodies em leveduras e mamíferos, é constitutivamente expressa ao longo da metaciclogênese do T. cruzi. Ela localiza-se principalmente em foci citoplasmáticos que variam em número quando as células são submetidas a condições de estresse ou ao tratamento com as drogas que bloqueiam a tradução. Além disso, aparentemente TcXRNA e TcDHH1, tem co-localização parcial em epimastigotas, que é reduzida nas formas em diferenciação do parasita. Verificamos também que a proteína TcXRNA está presente em grânulos citoplasmáticos ao redor do núcleo. Esta localização se assemelha a de grânulos perinucleares de oócitos de Drosophila, mas ainda é necessário investigar a relação funcional entres eles. Atualmente, estamos investindo em ensaios de imunoprecipitação seguidos por espectrometria de massas e sequenciamento massivo dos RNAs, utilizando parasitas que expressam a proteína com etiquetas. Assim, pretendemos identificar outras proteínas destes grânulos e os RNAs alvos, para entender melhor o papel destas mRNPs, afinal, os dados obtidos até o momento indicam que os grânulos de TcXRNA são dinâmicos e podem estar envolvidos no metabolismo de mRNA com papel importante no controle da expressão gênica em T. cruzi.