Estudo da modulação de corpúsculs lipídicos em células epiteliais - Moreira, Luciana de Souza (2007)
Corpúsculos lipídicos são inclusões preenchidas principalmente por triglicerídeos e ésteres de colesterol, sendo também depósitos intracelulares de ácido araquidônico (AA). A participação de corpúsculos lipídicos na geração eicosanóides por células hematopoiéticas é suportada pela localização de proteínas envolvidas na cascata metabólica do AA e co-localização do produto final desta via, a prostaglandina E2 (PGE2). A PGE2 é o principal metabólito do AA produzido por células epiteliais, sendo um potente mediador capaz de modular a motilidade, sobrevivência celular, proliferação celular e angiogênese, que são processos importantes na restauração da homeostase do tecido epitelial após injúria. O nosso objetivo central é investigar a modulação de corpúsculos lipídicos em células epiteliais. Analisando a indução de corpúsculos lipídicos por mediadores inflamatórios, as vias de sinalização intracelular envolvidas, e a modulação de corpúsculos lipídicos durante a proliferação e migração celular. Utilizamos como modelo experimental uma linhagem celular derivada de epitélio intestinal normal de rato (IEC-6) A avaliação de corpúsculos lipídicos é realizada através da marcação com tetróxido de ósmio e contagem por microscopia de campo claro. Análise da expressão de proteínas é realizada por SDS-PAGE e a produção de PGE2 por ELISA. Células confluentes não apresentam corpúsculos lipídicos, enquanto células não-confluentes possuem em média de 15 a 20 corpúsculos/célula. A deprivação de soro fetal bovino leva a uma redução no número de corpúsculos lipídicos. Estímulos inflamatórios em células confluente, como IL-1?, PAF e PMA não provocam alterações no número de corpúsculos lipídicos. Enquanto a adição de AA induz a formação de corpúsculos lipídicos de maneira dose-dependente. A adição de PGE2, ou o tratamento com inibidores de COXs NS398 e Salicilato de Valeril não alteram o número de corpúsculos lipídicos. Inibidores seletivos de MEK 1 e 2 e de JNK 1,2 e 3 não interferem na indução de corpúsculos lipídicos por AA, enquanto o inibidor de p38 reduz em 80% a formação dessas estruturas. Nossos resultados indicam uma forte relação entre a biogênese de corpúsculos lipídicos e proliferação celular, e que essas organelas são induzidas de forma estímulo-específica em células epiteliais