Avaliação in vitro do papel de células-tronco mesenquimais geneticamente modificadas na fibrogênese hepática - Fernandes, Camila Juliet Barbosa (2018)
O potencial terapêutico de células da medula óssea tem sido bastante investigado no campo da medicina regenerativa. Embora os resultados iniciais de ensaios pré-clínicos e clínicos com células da medula óssea em doenças hepáticas sejam bastante promissores, os efeitos terapêuticos não são duradouros. Assim, maiores estudos vêm sendo realizados com o objetivo de otimizar a terapia celular. Dentre as populações de células-tronco, as células-tronco mesenquimais (CTMs) se destacam por apresentarem plasticidade genômica e características imunomoduladoras e imunossupressoras que ampliam as possibilidades de utilização terapêutica. Um dos fatores imunomodulatórios secretados pelas CTMs é o fator de crescimento de hepatócitos (HGF), cuja participação em processos antifibróticos e antiinflamatórios já é descrita. Diante disso, o presente trabalho objetivou avaliar o potencial antifibrogênico de CTMs superexpressando HGF na fibrogênese hepática. Para atingir os objetivos propostos, as CTMs foram obtidas de medula óssea de camundongos C57BL/6 e caracterizadas.O RNA total foi extraído de tecido hepático de camundongos da mesma linhagem para obtenção do gene Hgf que foi amplificado por PCR, clonado no vetor de expressão pCMV-LacZ e transfectado nas CTMs. A transfecção se mostrou eficiente pela análise da expressão do Hgf feita por RT-PCR. As CTMs modificadas foram co-cultivadas por 48h com células estreladas hepáticas (CEHs) da linhagem GRX. citocinas e a expressão do marcador da fibrogênese hepática, alfa-actina de músculo liso (α-SMA) foram quantificados, onde foi observado um aumento na secreção de IL-6 e redução de TGFβ1. Os baixos níveis de α-SMA observados, juntamente com os achados da caracterização ultraestrutural e molecular da linhagem GRX, demonstraram que estas células podem não se encontrar no seu fenótipo ativado, reforçando a necessidade de uma observação mais criteriosa para a utilização desta linhagem em estudos in vitro da fibrogênese hepática.