Identificação molecular de Tripanossomatídeos da coleção de protozoários da Fiocruz (Fiocruz-Colprot) - Martins, Carolina Boucinha (2016)
A classe Kinetoplastea tem como apomorfia o cinetoplasto, rede de DNA mitocondrial altamente compactada, e alberga protozoários da família Trypanosomatidae descritos como parasitas uniflagelados. A Coleção de Protozoários da Fiocruz (COLPROT) conta com um vasto acervo de integrantes da família Trypanosomatidae. O estudo acerca dos tripanossomatídeos de insetos e plantas tem sido negligenciado e as principais espécies conhecidas foram descritas com base exclusivamente na morfologia, ciclo de vida, e hospedeiro de isolamento. Entretanto, apenas a metodologia utilizada pela taxonomia clássica nem sempre reflete as relações filogenéticas dos organismos. Em vista disso, o objetivo deste estudo foi revisar a identificação taxonômica dos tripanossomatídeos de insetos e plantas depositados na COLPROT, utilizando as ferramentas moleculares atuais. Para isso, foram utilizados dois marcadores nucleares (gGAPDH e V7V8 SSUrRNA), que têm larga base de dados no Genbank e são amplamente difundidos como ferramenta taxonômica de tripanossomatídeos. Optamos também pela análise de parte do gene mitocondrial COI, utilizado como marcador universal na identificação de espécies animais, visando dar início a construção de um banco de dados desse gene para tripanossomatídeos. Durante nossas análises, ficou evidente que não há um consenso na literatura a respeito dos limiares de divergência genética aceitáveis para a determinação de novos gêneros e espécies e para a sinonímia destes. Nós realizamos então uma exaustiva busca na literatura dos principais autores estudiosos destes tripanossomatídeos e fizemos o levantamento de todas as sequências disponíveis no Genbank dos marcadores mais utilizados (SSUrRNA e gGAPDH). Através da comparação destas sequências, foram estabelecidos os valores de 2% de divergência genética para limitação de espécies para o marcador V7V8 SSUrRNA e 4% de divergência genética para o marcador gGAPDH. Para limitação de gênero, nós estabelecemos 11% de divergência genética para ambos os marcadores. Tendo constituído estes valores para os marcadores SSUrRNA e gGAPDH juntamente com a análise do marcador COI, nós realizamos a curadoria da COLPROT. Este resultado ficou dividido em quatro partes: i) a confirmação taxonômica de 45 depósitos; ii) a identificação taxonômica de 29 depósitos sem caracterização prévia; iii) a identificação de 13 depósitos sujeitos a revisão taxonômica; iv) a identificação de dois depósitos candidatos a novos gêneros e outros dois depósitos candidatos a espécie nova. Os resultados nos fizeram observar que o marcador COI foi capaz de discriminar as espécies e gêneros dos tripanossomatídeos estudados, corroborando os marcadores mais utilizados. Isso confirma a aplicabilidade deste marcador como barcode de tripanossomatídeos. Por último, nós realizamos o resgate histórico do acervo da COLPROT, organizando e informatizando toda a informação disponível a respeito de cada depósito utilizado neste trabalho. Essas informações foram consolidadas em um banco de dados (Sicol) e o acervo da Coleção pode ser consultado no site da COLPROT (www.colprot.fiocruz.br). Os resultados aqui apresentados indicam a necessidade de uma ampla revisão taxonômica de tripanosomatídeos isolados de insetos e planta descritos antes da identificação molecular, e ressaltam a importância do trabalho de curadoria das coleções biológicas.