Estudo da fauna e avaliação diagnóstica de infecção natural por Leishmania spp. de Flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) do município de Rio Branco (Acre, Brasil) empregando ensaios moleculares - Pereira, Thaís de Araujo (2013)
Casos de leishmaniose tegumentar americana vêm aumentando nos últimos anos no Estado do Acre, com a identificação de espécies distintas de Leishmania isoladas de lesões cutâneas de pacientes. Entretanto, ainda não há registros de leishmaniose visceral, e pesquisas sobre a fauna de flebotomíneos no Estado ainda são limitadas. O presente estudo teve como principal objetivo ampliar o conhecimento sobre a fauna flebotomínica no município de Rio Branco (Acre) e avaliar a taxa de infecção natural por Leishmania spp. nos insetos capturados. Foram realizadas coletas com o apoio da Secretaria Municipal de Vigilância e Saúde do município, no período de Abril 2011/Abril 2012, utilizando armadilhas luminosas dispostas em seis áreas - cinco residenciais e uma área de laser. Após identificação taxonômica segundo metodologia proposta por Galati, as fêmeas de flebotomíneos foram avaliadas individualmente para infecção natural por Leishmania spp. através de ensaios de PCR-multiplex associados à hibridização com sondas específicas (subgênero Viannia e Leishmania infantum) e revelação enzimática Foram utilizados dois conjuntos de iniciadores por reação, sendo um desenhado para a região conservada dos minicírculos do kDNA gênero Leishmania, e outro para um gene constitutivo específico de flebótomos (cacophony) gênero Lutzomyia. Na tentativa de identificar a espécie de Leishmania encontrada nos flebotomíneos, foram realizados ensaios de PCR-RFLP, clonagem e sequenciamento do fragmento de 120 pb correspondente ao produto amplificado contendo a região conservada dos minicírculos de kDNA. Foram coletados 455 espécimes de flebotomíneos, sendo 256 fêmeas e 199 machos; 173 fêmeas foram destinadas à análise molecular diagnóstica. A identificação taxonômica dos insetos possibilitou a caracterização de 20 espécies, e sete sendo identificadas apenas até gênero. Os espécimes classificados no gênero Trichophoromyia spp. foram os mais abundantes com 146 indivíduos, seguido da espécie Trichophoromyia auraensis com 96, e Nyssomyia whitmani com 74 exemplares coletados. Os gêneros Trichophoromyia spp. e Nyssomyia spp. foram os mais abundantes, tanto nas áreas de mata como no peridomicílio A análise diagnóstica detectou 12 fêmeas positivas para infecção por Leishmania spp., correspondendo à 6,9% (12/173). Destas, 5,2% corresponderam à Trichophoromyia spp. (9/173), 1,1% à Evandromyia saulensis (2/173) e 0,6% Pressatia spp. (1/173). O sequenciamento do produto amplificado de Leishmania spp. das 12 amostras positivas, possibilitou a construção de uma árvore filogenética, a qual revelou similaridades entre clones das amostras-teste e amostras referência de L. (V.) braziliensis, L. (V.) lainsoni, subgênero Viannia, L. (L.) amazonensis, L. (L.) chagasi, L. (L.) infantum e gênero Sauroleishmania. Devido à complexidade dos dados, maiores estudos ainda se fazem necessários para a identificação precisa das espécies de Leishmania detectadas no presente trabalho