Análise filogenética e implementação de ferramentas moleculares na identificação de isolados do complexo Sporothrix spp - Oliveira, Manoel Marques Evangelista de (2013)
A esporotricose, micose subcutânea causada pelo complexo Sporothrix schenckii, é cosmopolita e a mais frequente na América Latina. Nos últimos anos tem aumentado significativamente o número de casos no Brasil, com destaque para o aumento no estado do Rio de Janeiro. Atualmente, quatro novas espécies dentro do gênero Sporothrix têm sido consideradas, sendo essas: Sporothrix brasiliensis, Sporothrix globosa, Sporothrix mexicana e Sporothrix luriei, as quais são altamente associadas às duas espécies já existentes S. schenckii e S. albicans, sendo a última recentemente renomeada com o S. pallida . A caracterização destas espécies foi realizada por meio da utilização de provas fenotípicas: morfologia de conídios, teste de crescimento à 30ºC e 37ºC , teste de termotolerância, auxonograma e sequenciamento parcial do gene da calmodulina . O princ ipal objetivo deste estudo foi a caracterização de espécies do complexo Sporothrix por meio de taxonomia molecular através do desenvolvimento de metodologia baseada em ácidos nucléicos para a identificação das espécies e a determinação do perfil proteômico do complexo Sporothrix , utilizando metodologia baseada em espectrometria de massa em célula intacta (MALDI - TOF ICMS). No presente trabalho foi realizada a identificação em nível de espécie de isolados clínicos e ambientais oriundos da epidemia de esporotr icose no Rio de Janeiro, de um surto zoonótico familiar no e stado do Espírito Santo e dois isolados clínicos oriundos de Portugal. Por meio da identificação por taxonomia polifásica de 246 isolados clínicos e um ambiental obtidos da en demia de esporotricos e no Estado do Rio de Janeiro foi demonstrado que esta abordagem é fundamental para a identificação das espécies do complexo Sporothrix A identificação em nível de espécies d e cepas d o complexo Sporothrix spp. provenientes de diferentes regiões geográficas, demonstrou S. globosa e S. mexicana circulando em Portugal, sugerindo que a esporotricose seja subdiagnosticada naquele país, e que esta micose poderia ser considerada emergente no sul da Europa. Também descrevemos o pri meiro surto causado por S. brasiliensis fora da zona endêmica do Rio de Janeiro. Para a identificação das espécies de Sporothrix descrevemos uma PCR fingerprinting utilizando o primer universal T3B, o qual distinguiu com sucesso as espécies S. brasiliensis, S. globosa, S. mexicana, e S. schenckii. Essa metodologia gerou padrões de bandas distintos, permitindo a correta identificação de todos os 35 isolados clínicos estudados apresentando 100% de concordância com o sequenciamento parcial do gene da calmoduli na , sendo uma técnica rápida e de fácil execução. A padronização da metodologia do MALDI - TOF ICMS, p ossibilit ou a determinação de perfis proteômicos distintos entre as espécies do complexo Sporothrix , demostrando a aplicabilidade desta técnica na diferenciação das espécies. A caracterização de espécies do complexo Sporothrix em nosso estudo foi a maior reportada na literatura especializada até o presente. Concluimos que a taxonomia polifásica é fundamental para diferenciação das espécies de Sporothrix, podendo ser realizada com as técnicas de T3B Fingerprinting e MALDI - TOF ICMS, tendo importância na epidemiologia e clínica da esporotricose