Estudo dos marcadores de exaustão no baço de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum - Souza, Tainã Luís de (2018)
Na leishmaniose visceral canina (LVC), o baço é um dos principais órgãos afetados e a desorganização da microarquitetura esplênica tem sido associada à progressão da doença, redução da expressão de citocinas e quimiocinas e falha no controle da carga parasitária, sendo este perfil compatível com a exaustão celular. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão in situ dos marcadores de exaustão e sua relação com a desorganização da microarquitetura esplênica e carga parasitária. Para tal, 41 cães naturalmente infectados com Leishmania infantum foram submetidos à quantificação da carga parasitária por PCR quantitativo do alvo ssrRNA em tecido esplênico. Além disso, foi feita a avaliação histopatológica a partir de cortes de baço corados com hematoxilina e eosina com o objetivo de avaliar o grau de desorganização da polpa branca esplênica (PBE). Os animais foram agrupados de acordo com a organização da PBE e carga parasitária como: 1- organizado/baixa carga parasitária (OB, n=10); 2- desorganizado/baixa carga parasitária (DB, n=22); 3- desorganizado/alta carga parasitária (DA, n=8). Células CD4, CD8, IFN-\F067, IL-10, TIM-3 e CTLA-4 foram detectadas por imuno-histoquímica e as células apoptóticas pela técnica de TUNEL A desorganização da PBE ocorreu juntamente com a redução dos folículos linfoides/mm2, células CD4 e agravamento da doença. IFN-\F067 e células CTLA-4 foram detectadas nos cães OB havendo redução de acordo com o aumento da desorganização e carga parasitária. TIM-3 foi altamente expresso e similar entre os grupos. Apoptose foi detectada mesmo em cães organizados, aumentando em cães DB e reduzindo em DA. Houve correlações negativas entre TIM-3 e CTLA-4, negativas entre IFN-\F067 e células apoptóticas, e positivas entre CTLA-4 e células apoptóticas. Células B TIM-3+ foram detectadas por imunofluorescência em todos os grupos, não havendo diferença entre estes. A expressão gênica de PD-1, PD-L1, PD-L2 e LAG-3 foi identificada, onde a expressão foi menor nos grupos que apresentaram maior desorganização e carga parasitária no baço, sendo significativa esta diferença em PD-L1 e LAG-3. O conjunto de resultados indica que a exaustão em células T deve ocorrer nos estágios iniciais da infecção, uma vez que os animais OB apresentaram células TIM-3+, CTLA-4+, PD-1+, PD-L1+, PD-L2+ e LAG-3+. A apoptose é o mecanismo envolvido na redução de folículos linfoides, células CD4, CTLA-4 e IFN-\F067. O presente estudo demonstra uma associação entre marcadores de exaustão, apoptose e desorganização esplênica, redução de linfócitos CD4, falha no controle da carga parasitária e piora da enfermidade.