Impacto do tamponamento do CA2+ nuclear na expressão gênica associada à radioresistência em carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço - Jardim, Camila Arlen Diniz (2013)
O Carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço acomete mucosas do trato aerodigestivo superior, incluindo cavidade oral, laringe e faringe e é caracterizado por elevada agressividade e radioresistência, apresentando, muitas vezes, recidivas após o tratamento. Em trabalho anterior, foi demonstrado pelo nosso grupo que o tamponamento do Ca2+ nuclear é capaz de reduzir a taxa proliferação do carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (células A431), bem como a sobrevida após a irradiação. Neste trabalho, investigamos quais genes estariam envolvidos na radiosensibilização observada mediante tamponamento do Ca2+nuclear, utilizando o protocolo RaSH (rapid subtraction hybridization), que permitiu a identificação de genes diferencialmente expressos nas células apenas irradiadas (RX) e nas células irradiadas em que o Ca2+ nuclear fora tamponado (RX/Ca2+ T). Foram sequenciados 91 clones, dos quais 8 mostraram elevada similaridade (93-100%) com sequências conhecidas depositadas no genebank (NCBI). Entre os clones selecionados, 3 foram escolhidos, sendo a Calpaína e a NLK selecionadas como mais expressas na condição RX/Ca2+T e a Kinesina, selecionada na condição RX. Estas proteínas são envolvidas em vias de sinalização críticas ao desenvolvimento tumoral, com base na análise por Blastn. Como a Kinesina foi identificada como superexpressa na condição RX, nós investigamos se seu silenciamento era capaz de produzir efeitos similares aos induzidos pelo tamponamento do Ca2+ nuclear. O silenciamento da Kinesina com siRNA promoveu a redução da formação de colônias e da sobrevida, em associação (90±2%) ou não (60±2%) com RX. Estes dados mostram que a Kinesina é um potencial alvo molecular a ser utilizado na radiosensibilização de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço.