Estudo funcional de proteínas da família das gelsolinas de Schistosoma mansoni - Araújo, Juliano Michel de (2018)
Técnicas de genética reversa como RNA de interferência a (RNAi) são um conjunto de ferramentas poderosas utilizadas em caracterizações funcionais. Essas técnicas têm sido aplicadas na identificação e validação de proteínas de Schistosoma mansoni, possibilitando uma melhor compreensão da interação hospedeiro-parasito e a identificação de alvos vacinais e de drogas. Proteínas imunorreativas a soro de indivíduos infectados e não infectados, ou naturalmente resistentes, de área endêmica para esquistossomose foram identificadas, dentre elas, proteínas da família das gelsolinas. Em alguns organismos as gelsolinas desempenham funções na regulação dos filamentos de actina que participam na formação do citoesqueleto, motilidade celular e estimulação da apoptose. Devido a importância das gelsolinas, elas foram escolhidas para caracterização por RNAi. Os níveis de transcritos e proteínas foram analisados nas diferentes fases do ciclo de vida doS. mansoni e também em esquistossômulos silenciados, nesses, também foi feita a análise de fenótipo. O papel das gelsolinas na interação parasito-hospedeiro foi estudado através da infecção de camundongos com parasitos silenciados. Sua localização foi determinada e níveis proteicos também foram acessados por imunofluorescência. Os resultados mostraram que os genes são mais expressos em vermes adultos fêmeas e, a proteína, é expressa em todas as fases do ciclo de vida do verme sendo mais abundante nas fases de cercária e esquistossômulo. Foi constatada uma distribuição difusa das gelsolinas por todo o esquistossômulo e co-localização com filamentos de actina, principalmente no tegumento. Assim, é possível que gelsolinas de S. mansoni estejam envolvidas em mecanismos de organização do citoesqueleto. Seis dias depois do tratamento com dsRNA foram verificados os níveis de silenciamento dos transcritos para esquistossômulos expostos à dsRNA-gelsolina (77%), vilina (93%) e para ambos, gel/vil (71%-gel e 89%- vil). A análise por densitometria óptica das bandas mostrou que esquistossômulos expostos ao dsRNA-gelsolina, -gelsolina/vilina e -vilina não apresentaram diminuição nos níveis proteicos em relação aos parasitos tratados com dsRNA-GFP, apesar de que em ensaio de imunofluorescência, esquistossômulos silenciados para os mesmos genes apresentaram uma diminuição na intensidade de fluorescência, respectivamente de: 9,9%, 11,9% e 39,1%. O fenótipo e viabilidade permaneceram inalterados para todos os tratamentos. Camundongos infectados com esquistossômulos silenciados foram perfundidos e não houve relação entre número de vermes e número de ovos retidos no figado e intestino. Este trabalho traz importantes conhecimentos acerca da expressão de gelsolina e vilina nas diferentes faseso ciclo de vida de S. mansoni, suas localizações e entendimento sobre a importância destas proteínas no desenvolvimento do parasito. É necessário ressaltar a importância de estudos de caracterização funcional de genes na era pós-genômica, uma vez que, até hoje; há poucas proteínas caracterizadas em S. mansoni.