Caracterização funcional de quitinases de Rhodnius prolixus - Gama, Maiara do Valle Faria (2017)
Quitinases são enzimas responsáveis pela hidrólise de ligações glicosídicas no interior de cadeias de quitina. Em insetos, elas estão relacionadas ao remanejamento da quitina durante o desenvolvimento e ecdise, na digestão de insetos detritívoros e predadores, e no controle da espessura da membrana peritrófica intestinal. As quitinases de insetos descritas até o momento pertencem à família 18 das glicosídeo hidrolases. O Rhodnius prolixus é um dos principais vetores da doença de Chagas, causada pelo parasita Trypanosoma cruzi. No genoma de R. prolixus são encontrados 9 genes de quitinases, mas o papel dos transcritos correspondentes ainda não foi estudado em detalhe. O objetivo deste trabalho é o estudo detalhado da expressão dos transcritos de quitinase de R. prolixus e análise de seu papel fisiológico através do silenciamento por RNAi. O conhecimento do papel de quitinases neste inseto pode revelar novos alvos para controle do vetor, assim como revelar novos aspectos de sua fisiologia e da interação entre o inseto e microrganismos Através de análises filogenéticas das sequências codificantes de quitinases, foi constatado que esses genes pertencem à diferentes grupos da família 18 das glicosídeo hidrolases, já descritos em outros insetos. Para estudo funcional verificou-se o efeito do silenciamento da expressão desses genes utilizando RNAi. Foi realizada uma curva de concentração injetando quantidades crescentes de dsRNA nos insetos (1\03BCg, 3\03BCg, 6\03BCg e 2 x 3\03BCg) a fim de definir qual a menor concentração que permitiria obter uma maior porcentagem de silenciamento para os diferentes genes GH18. Com base nos resultados obtidos o gene RpCht7 foi escolhido para análise dos fenótipos, pois apresentou uma alta taxa de silenciamento. O silenciamento do gene RpCht7 dobrou a mortalidade de insetos em jejum quando comparado ao controle injetado com dsGFP, mas não alterou a ingestão sanguínea, diurese, digestão, porcentagem de muda, defeitos na muda, razão sexual, tempo médio de eclosão e porcentagem de eclosão dos ovos postos. Entretanto, foi observada uma alteração na oviposição, uma vez que as fêmeas silenciadas para esse gene colocam 34% ovos a menos que os controles. As diferenças na postura de ovos ocorrem de 14 a 20 dias após a alimentação sanguínea. Dessa forma, fica inferido que o gene RpCht7 tem um papel importante na reprodução e pode ser um alvo promissor pra manipulação da aptidão vetorial de R. prolixus