Identificação de antígenos específicos para o desenvolvimento de um sistema de diagnóstico sorológico diferencial para Zika e Dengue - Colombarolli, Stella Garcia (2018)
A zika é uma arbovirose causada pelo Zika virus, gênero Flavivirus. A infecção por ZIKV está relacionada com complicações neurológicas graves, como a microcefalia e danos no SNC em recém-nascidos, que acontecem através da transmissão do vertical da gestante para o feto. Este fato, aliado a co-circulação de outros arbovírus e a dificuldade de diferenciar infecções baseada em sintomas clínicos, especialmente nos momentos iniciais da doença reflete a necessidade de se desenvolver um teste diagnóstico diferencial específico para a zika. Os objetivos deste projeto foram: realizar a predição de epítopos para células B a partir das sequências de ZIKV; identificar epítopos antigênicos específicos do ZIKV com o potencial de reação específica e diferencial entre DENV e ZIKV; desenhar peptídeos compostos pelos epítopos selecionados e testar o reconhecimento diferencial dos peptídeos produzidos. Para isso, foi feito o download de sequências sul-americanas e africanas do ZIKV, e as sequências de referência do DENV 1, 2, 3 e 4. Utilizando o preditor de epítopos para células B, foram identificadas 37 regiões para ZIKV e 37 correspondentes para a sequência polivalente de DENV. No intuito de identificar epítopos que pudessem ser reconhecidos preferencialmente por soros de pacientes infectados por ZIKV, foi feita uma análise in silico comparativa entre a composição destes epítopos em relação aos seus aminoácidos e as suas propriedades bioquímicas, além de estudos conformacionais. Desta forma, foram selecionados 20 epítopos. Esses epítopos foram base para a construção de 20 peptídeos, que foram comercialmente sintetizados e utilizados em experimentos de microarranjo proteico utilizando 41 amostras de soros de pacientes infectados pelo ZIKV ou pelo DENV, além de 10 soros de voluntários saudáveis. Foi encontrado uma padrão de distribuição distintos das amostras quando avaliadas a reatividade dos isotipos IgM e IgG separadamente, que reflete a cinética de soroconversão nas infecções naturais por Flavivirus. Os epítopos de ZIKV não apresentaram reconhecimento específico para o grupo de amostras positivas para zika, apesar de apresentarem reconhecimento diferencial significativo para o grupo de amostras positivas para dengue. Os dados levantados neste trabalho permitem dizer que a metodologia empregada in silico para a predição de epítopos para células B, bem como para a seleção destes epítopos para a validação in vitro foi executada com sucesso, contudo, não foi possível identificar um peptídeo capaz de reconhecer diferencialmente amostras de ZIKV e DENV.