Estudo da ativação e apoptose plaquetária na infecção malárica por Plasmodium vivax - Moraes, Isabel Matos Medeiros de (2016)
Introdução: O Plasmodium vivax é responsável por cerca de 85% das infecções por malária no Brasil. A malária vivax sempre foi considerada uma infecção benigna. No entanto, formas mais graves da doença, como anemia grave e plaquetopenia tem sido descritas. Além disso, as causas para a plaquetopenia ainda não foram totalmente esclarecidas. As plaquetas podem ativar e interagir com monócitos, principalmente pela ligação da P-selectina. O número de agregados plaqueta-monócito (PMA) é um marcador sensível para a detecção da ativação plaquetária. Plaquetas são células anucleadas que possuem uma via de apoptose funcional, e a proteína anti-apoptótica Bcl-xL, membro da família Bcl-2, é uma mediadora chave da sobrevida de plaquetas. A apoptose de plaquetas e a sua ligação com leucócitos contribuem para a redução da contagem de plaquetas. Heme e hemozoína (Hz) são liberadas na circulação durante a infecção e contribuem para a patogênese da malária. Na presente tese, nós estudamos a ativação e apoptose plaquetária durante a infecção por P. vivax e investigamos a resposta de plaquetas ao heme e à Hz. Material e métodos: Sangue foi coletado de pacientes com malária vivax que se apresentaram à Fundação de Medicina Tropical Dr. Heitor Vieira Dourado-Manaus e também de controles. A formação de PMA, expressão de P-selectina, de caspases e de Bcl-xL foram analisadas. Plasma foi utilizado para a quantificação de mediadores inflamatórios Plaquetas isoladas foram estudadas quanto ao seu transcriptoma. Plaquetas de voluntários sadios foram incubadas com plasma de pacientes com malária vivax e de controles sadios e analisadas para a ativação de caspase 9. Além disso, plaquetas de controles foram incubadas com heme e hemozoína sintética (sHz) e a ativação de caspases e a exposição de fosfatidilserina (PS) foram analisadas. Inibidores de calpaínas e proteassoma foram utilizados para se avaliar a participação destes componentes na degradação de Bcl-xL. Resultados: Pacientes com malária vivax apresentaram uma baixa contagem de plaquetas quando comparados com sujeitos controles. No entanto, pacientes apresentaram um aumento do volume plaquetário médio-VPM quando comparados com controles Pacientes infectados com P. vivax mostraram aumento no número de PMA e de P-selectina em relação aos controles. Pacientes com malária vivax apresentaram aumento nos níveis plasmáticos de IL-6, IL-10, IL-1\03B2, IFN-\03B3, MCP-1, RANTES, PF4 e hemopexina quando comparados com controles. Pacientes com plaquetopenia grave possuíam níveis de haptoglobina menores quando comparados com controles ou com pacientes com contagem de plaqueta maior do que 50.000/ uL. A análise do transcriptoma revelou 215 genes que tinham aumento de expressão, de pelo menos 2x, e 189 genes que tinham diminuição de expressão, de pelo menos metade, em plaquetas de pacientes com malária vivax. Plaquetas incubadas com plasma de pacientes com malária vivax apresentaram aumento de ativação da caspase 9. Plaquetas de pacientes infectados com P. vivax apresentaram aumento da ativação das caspases 3 e 9, no entanto, a expressão de Bcl-xL foi a mesma entre pacientes e controles. Heme e sHz induziram a ativação das caspases 3 e 9 e também exposição de PS em plaquetas de controles. Heme induziu a degradação de Bcl-xL através da ativação de calpaínas e não do proteassoma. Conclusão: A ativação e apoptose plaquetária podem ser contribuir para a plaquetopenia observada na infecção por P. vivax e o heme e a hemozoína liberados durante a infecção são dois possíveis agentes causadores dessa baixa no número de plaquetas