Aplicabilidade de anticorpos monoclonais e soros hiperiumunes, na técnica de imuno-histoquímica, para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar - Saliba, Juliana Wilke (2019)
Existem diferentes métodos descritos para o diagnóstico laboratorial da leishmaniose tegumentar (LT). A imuno-histoquímica (IHQ) é considerada uma técnica alternativa e complementar do exame histopatológico para o diagnóstico da doença. Entretanto, as evidências sobre a aplicabilidade, reprodutibilidade e o desempenho de anticorpos monoclonais e soros hiperimunes disponíveis para a técnica de IHQ são relativamente escassas. Por isso, foram selecionados, a partir de uma pesquisa de anticorpos comerciais ou registrados em base de dados, dois anticorpos monoclonais (AcMo), um anti-Leishmania A2 (AcMo-A2) e outro anti-Leishmania GP63 (AcMo-GP63), e incluídos dois soros hiperimunes, um produzido contra a proteína recombinante KMP-11 de L. braziliensis (SH-KMP-11) e outro obtido de um “pool” de soros de cães diagnosticados com leishmaniose visceral (SH), para a realização deste trabalho. A padronização da técnica de IHQ foi realizada em amostras de lesões de pele de hamsters infectados experimentalmente com L. braziliensis, L. amazonensis e L. guyanensis. O desempenho da técnica de IHQ, usando anticorpos monoclonais e soros hiperimunes foi avaliado em 72 amostras de lesões de pacientes com suspeita clínica de LT, atendidos no Centro de Referência em Leishmanioses do Instituto René Rachou/FIOCRUZ. Os resultados foram interpretados por três observadores independentes, de acordo com os critérios “Topografia”, “Localização” e “Forma”. A maior sensibilidade e área sob a curva (AUC) da técnica de IHQ foram de 66,1% e 0,761 com o uso do SH para diagnóstico da LT. Ao comparar os resultados da IHQ com outros exames de referência, foi observado que a IHQ e o exame direto (imprint) apresentaram uma proporção de 73,4% de casos corretos e a IHQ e a PCR convencional uma proporção de 70,8% de casos corretos. A concordância entre os observadores variou conforme o critério de análise morfológica e o propósito da interpretação da IHQ. Adicionalmente, os resultados da técnica de IHQ foram muito influenciados pelo tempo de evolução da lesão. A positividade da IHQ nas lesões recentes, com tempo menor ou igual a 75 dias, foi quatro vezes maior (Odds ratio = 4,04) que nas lesões antigas. Os resultados obtidos nesse estudo confirmam que a técnica de IHQ, usando soro hiperimune de cão, constitui uma importante ferramenta no diagnóstico laboratorial da LT.